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实时荧光定量PCR技术有什么应用?

信息来源:数字pcr仪_荧光定量pcr仪_金属浴_核酸提取仪_基因扩增仪_石家庄奥龙科技有限公司    2019-5-30

  实时荧光定量PCR技术可用于微小残留病变的检测、细胞因子的表达分析、肿瘤耐药基因表达的研究、病毒感染的定量监测,下面PCR仪厂家给大家详细的说说。

  1、微小残留病变的检测。肿瘤疾病尤其是血液的恶性肿瘤常伴有特异性基因的易位,这种易位往往可以作为监测临床治疗效果的一种肿瘤标志。虽然在过去的几十年里治疗方案的改进已大大地延长了病人的生存期,但是缓解期的病人仍存在复发的危险性。因此微小残留病变(MRD)的检测对于进一步调整治疗方案是至关重要的。Real-timeQ-PCR的应用正成为检测肿瘤微小残留分子标志的一种必备的研究工具。通过对肿瘤融合基因的定量测定能指导临床对病人实行个体化的治疗。急性粒细胞性白血病(AML)最常见的染色体异常是交互易位t(8;21)(q22;q22),在这易位中,AML-1转录因子基因和8号染色体的MTG8基因发生融合,致使正常的AML-1转录调控受到影响,这可能是白血病的病因。目前的研究证明用real-timeQ-PCR来检测融合基因有助于对这些病人的MRD进行定量,其作为预后的指标或对治疗方案的评估是有价值的。同样的方法也被用于定量其它的易位融合基因水平,如慢性粒细胞性白血病(CML)的BCR-ABL融合基因;急性淋巴细胞性白血病(ALL)的白血病特异的TEL-AML1融合基因;滤泡状淋巴瘤(FL)的染色体易位t(14;18)(q32;q21)和bcl-2重排等。许多研究都在很大程度上受益于real-timeQ-PCR方法的应用,随着技术的发展,Real-timeQ-PCR的运用将不断地扩大。

  2、细胞因子的表达分析。细胞因子是调节蛋白,它通过调节免疫反应(包括淋巴细胞活化、增殖、分化、生存和凋亡)在免疫系统中起着核心作用。许多不同类型的细胞都能分泌这种低分子量的蛋白质,其中包括淋巴细胞、抗原递呈细胞、单核细胞、内皮细胞和成纤维细胞。细胞因子可被分为不同的组;白介素(IL-1~IL-23),干扰素(IFN-α,IFN-γ等),集落刺激因子(CSF),肿瘤坏死因子(TNF),肿瘤生长因子(TGF-β等)和化学因子(MCP-1,MIP-1等)。为了阐明在许多炎症反应,自身免疫性疾病和器官移植排异中的免疫致病途径,细胞因子mRNA表达谱的可靠定量是很重要的。尽管被检样本中细胞因子含量往往极低,然而real-time反转灵PCR(RT-PCR)以其高敏感性和准确性在细胞因子的定量中越来越受到青睐。

  3、肿瘤耐药基因表达的研究。对化疗药物的耐药是治疗肿瘤病人的主要障碍。由于耐药限制了许多肿瘤的成功治疗,因此研究肿瘤细胞对耐药机制就变得十分重要。目前研究中发现主要的耐药机制有:ATP结合盒基因超家族(ATP-bindingcassettesuperfamily)的膜转运蛋白介导的耐药,这些蛋白包括:MDR-1基因编码的P-糖蛋白(P-gp),多药耐药相关蛋白(MRP),肺耐药相关蛋白(LRP),乳腺癌耐药蛋白(BCRP)等;酶介导的耐药,包括拓扑导构酶(Topo),谷胱甘肽(GSH)及谷胱甘肽-S-转移酶(GST),蛋白激酶C(PKC),脱氧胞嘧啶核苷激酶(deoxycytidinekinase)等,凋亡基因介导的耐药,如bcl-2家族,p53基因,c-myc等。多药耐药(MDR)是多因素,多种机制共同作用的结果。real-time反转录PCR(RT-PCR)是了解肿瘤耐药,指导临床治疗策略的有用手段,它能观测用药前后及复发时肿瘤细胞的耐药基因mRNA表达变化,从而及时调整治疗方案和评价疾病的预后。

  4、病毒感染的定量监测。扩增技术的发展使得对病毒的定性或定量检测的能力随之提高,也使研究病毒的负荷和疾病进展的关系成为可能。Real-timeQ-PCR是主要被运用于科研和诊断领域的扩增技术,它不仅能对病毒定性,而且由于其实验的批间和批内差异小,重复性好,因此能方便、快速、灵敏、准确地定量病毒DNA或RNA的序列,更重要的是从中可以动态地研究在整个病程中潜在病毒的复活或持续,从而使临床医生和病毒学家能检测临床的变化,如抗病毒治疗的效果,耐药变异的出现等。目前运用较多的是在器官移值中对使用免疫抑制剂的病人用Real-timeQ-PCR来定量测定CMV感染。研究表明在骨髓移植的病人中用Real-timeQ-PCR检测CMV感染比传统的pp65抗原试验更敏感,抗CMV药物治疗能使血中的病毒含量下降,Real-timeQ-PCR对于快速定量骨移植病人的CMV感染和监测CMV复活是一个有用的工具。

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